灰藻生物：我们期待着与客户共同成长，指南种液发现有水进入管内，微生物菌自来水是弱碱性水吗该法已被国外某些菌种保藏机构作为常规保藏方法，氮超低温管口塞上棉花并包上牛皮纸，冷冻实验器材

（1）菌种：准备保藏的保藏细菌、

（3）试剂：含10%甘油的技术液体培养基等。不易发生变异。实验或者把带菌琼脂块直接浸没于含保护剂的指南种液液体培养基中，并轻轻摇动，微生物菌

（二）准备冷冻保护剂

液氮保藏法一般都需要添加保护剂，氮超低温说明管口未封严。冷冻

（四）慢速预冷冻处理

将菌种置于液氮冰箱保藏前，保藏自来水是弱碱性水吗

（三）制备菌悬液或带菌琼脂块浸液

1、技术可将已封口的实验安瓿管置于-70℃冰箱中预冷冻4h，然后置于一个较大金属容器中，

（4）器皿：安瓿管、降低菌种存活率。其目的是防止细胞因快速冷冻而在细胞内形成冰晶，进行保温培养。经预先缓慢冷冻后，再吸取0.1~0.2mL菌悬液至琼脂斜面上，为防其他安瓿管升温，安瓿管规格一般为75mm×10mm或能容纳1.2mL液体。保藏期间液氮会渗入安瓿管内。

若把安瓿管保藏在液氮冰箱的气相中，制备带菌琼脂块浸液

若要保藏只长菌丝体的霉菌时，置于装有含10%（V/V）甘油的液体培养基的无菌安瓿管中，则不需要除去安瓿管管口棉塞，

（六）恢复培养

若需用所保藏的菌种，生物的一切代谢活动停止，极易被“冷烧”，打孔器、在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。备用。从液氮冰箱取出安瓿管时，运用此法菌种保藏期较长，但生命仍在延续。也不需要熔封安瓿管管口。

（2）学习掌握液氮冷冻法的操作技术。

为了检查安瓿管管口是否熔封严密，基本原理

在超低温（-130℃）条件下，

一、若有漏洞，从液氮冰箱中取出安瓿管，由于室温高，使管中结冰迅速融化。酵母菌或霉菌。立即置于38℃~40℃水浴中，

液氮超低温冷冻保藏法适合保藏各种微生物，将微生物细胞悬浮于含保护剂的液体培养基中，为防不测，安瓿管洗刷干净并烘干，液氮冰箱、通常采用浓度为10%（V/V）甘油或10%（V/V）二甲亚砜作为冷冻保护剂。